Ben Stone, ein aus Kanada stammender 23-Jähriger, der ohne Aufenthaltserlaubnis in den USA wohnt, hat keinen Job und lebt von dem knappen Geld, das er vor zehn Jahren als Entschädigung erhalten hat, als er von einem Postfahrzeug angefahren wurde. Der etwas infantile und wenig ehrgeizige Ben lebt in einem Haus zusammen mit seinen Freunden, die, ebenso wie er, in erster Linie nur Spaß haben wollen und Drogen wie Marihuana oder Magic Mushrooms nicht abgeneigt sind. Gemeinsam haben sie den Plan, eine Website zu eröffnen, welche die exakte Dauer von Nacktszenen bekannter Schauspielerinnen in Filmen auflistet.

Im Mittelpunkt der Handlung stehen die beiden Highschool-Außenseiter Seth und Evan. Der übergewichtige Seth und der schüchterne Evan sind seit Jahren befreundet, werden jedoch bald an verschiedenen Colleges studieren müssen, da nur Evan die Aufnahmeprüfung für das angesehene Dartmouth geschafft hat. Durch einen glücklichen Zufall wird Seth von seinem Schwarm Jules zu einer Party eingeladen, für die er Alkohol besorgen soll. Die beiden minderjährigen Freunde wenden sich daher an ihren gleichaltrigen Bekannten Fogell. Der linkische Brillenträger hat sich gerade einen nicht besonders geschickt gefälschten Führerschein besorgt, welcher ihn als angeblich 25-Jährigen namens McLovin ausweist, ein Vorname ist auf dem Führerschein nicht vorhanden.

Der Film beginnt mit einer Szene aus dem Jahr 1939 und zeigt von der US-Regierung durchgeführte Experimente, mit denen der Einfluss von Marihuana auf Menschen untersucht wird. Da die Testperson den Konsum sichtlich genießt und einen Vorgesetzten unter dem Einfluss der Droge in Rage versetzt, deklariert dieser die Droge als illegal. Vom Rückblick wechselt die Geschichte in die Gegenwart, zum Gerichtszusteller und starken Marihuanakonsumenten Dale Denton. Er besucht den Marihuana-Dealer Saul Silver und erhält von ihm eine seltene Marihuanasorte namens Ananas Express.

Sommer 1987: James Brennan hat gerade das Oberlin College absolviert. Am Ende der Abschlussfeier macht seine Freundin mit ihm Schluss – nach Meinung seiner Freunde, weil er ihr offenbart hat, dass er noch „Jungfrau“ ist. Seine Eltern können ihm die zum Abschluss geschenkte Reise nach Europa nicht bezahlen, da sein Vater einen schlechter bezahlten Job annehmen musste. Aufgrund des Jobwechsels können seine Eltern ihm zudem die Ausbildung an der Columbia University nicht bezahlen. James zieht mit seinen Eltern um, beginnt mit der Jobsuche und wird schließlich im Adventureland, einem lokalen Vergnügungspark in seiner Heimatstadt Pittsburgh, eingestellt, wo er einen der Stände betreut. James’ Unzufriedenheit mit seiner schlecht bezahlten Arbeit ändert sich erst, als er seine neue Kollegin Emily „Em“ Lewin kennenlernt, die ihn auf eine Party einlädt. Sie war früher mit Mike Connell, einem Teilzeitmusiker und Mitarbeiter James’, zusammen.

Larry Daley, vormals Nachtwächter des Naturhistorischen Museums, ist mittlerweile ein reicher Unternehmer geworden. Alle paar Monate besucht er sein altes Museum. Bei einem dieser Besuche muss Larry feststellen, dass die Exponate durch Hologramme und neue Technologien ersetzt werden sollen. Die Exponate kommen in das US-Nationalarchiv in Washington, D.C. Dort können sie ohne die goldene Tafel des Pharaos Ahkmenrah nicht mehr zum Leben erwachen. So denkt Larry. Doch am folgenden Abend wird er von Jedediah aus dem Umzugscontainer heraus angerufen: Durch den diebischen Kapuzineraffen Dexter ist auch die Tafel von Ahkmenrah, die die Figuren nachts zum Leben erweckt, mit nach Washington gekommen. Nun steht das komplette Smithsonian-Institut dort in der Nacht Kopf. Der Pharao Kahmunrah, Ahkmenrahs älterer böser Bruder, will die Tafel in seinen Besitz bringen, um eine Armee aus der Unterwelt zu holen und die Welt zu erobern.

Die beiden britischen Nerds und Science-Fiction-Fans Graeme und Clive machen Urlaub in den USA. Nach einem Besuch der Comic-Con in San Diego besuchen sie mit einem geliehenen Wohnmobil verschiedene Orte mit angeblichen UFO-Sichtungen. Als Ziele sind Area 51, Black Mailbox, Camp Verde (Arizona), Apache Junction und Roswell (New Mexico) vorgesehen. Daneben besuchen sie auch Drehorte von Science-Fiction-Filmen wie Vasquez Rocks.

Milo (Hader) schreibt einen Abschiedsbrief und schneidet seine Handgelenke. Inzwischen ist Maggie (Wiig) in ihrem Badezimmer und bereitet sich darauf vor, eine Handvoll Pillen zu schlucken, wird jedoch durch einen Anruf aus einem Krankenhaus unterbrochen, in dem sie darüber informiert wird, dass ihr Bruder - den sie seit zehn Jahren nicht mehr gesehen hat - erfolglos versucht hat, Selbstmord zu begehen. Maggie besucht Milo im Krankenhaus in Los Angeles und schlägt vor, dass er für eine Weile bei ihr in ihrer Heimatstadt Nyack, New York , bleiben würde; er stimmt widerwillig zu. Milo lernt Maggies geselligen Ehemann Lance (Luke Wilson) kennen, der Milo erzählt, dass er und Maggie versuchen, ein Baby zu bekommen. Dies überrascht Milo, da Maggie niemals Kinder gefordert hat. Milo kehrt sich mit der Stadt zurück und beobachtet Rich (Burrell), einen Mann mittleren Alters, der in einer Buchhandlung arbeitet. Inzwischen nimmt Maggie Tauchunterricht und hat Sex mit dem Ausbilder Billy (Holbrook).

Maggie Hardin, Direktorin für Business Development und Outreach für Kunst- und Designstudenten an der New School , beschließt, dass sie ein Kind haben möchte, und bittet einen ehemaligen College-Bekannten, Guy Childers, einen Mathematikmajor und Pickle-Unternehmer, um sein Sperma zu spenden. An der Universität lernt sie John Harding kennen, einen "fikto-kritischen Anthropologen", der mit einem Professor an der Columbia University verheiratet ist . John stößt sich wiederholt auf dem Campus an und vertraut Maggie an, dass er einen Roman schreibt. Maggie beginnt mit dem Lesen, und sie treffen sich regelmäßig, um über den Roman zu sprechen.

Die zehnjährige Sophie lebt in einem Waisenhaus für Mädchen in London, dessen Betreiberin die Kinder oft misshandelt. Nachts streift sie durch die Gänge und Flure des Hauses oder liest unter der Bettdecke Bücher. Als sie von draußen Geräusche hört, geht sie zum Fenster, um nachzuschauen, woher diese kommen. Dabei beobachtet sie eine riesige Gestalt mit einem schwarzen Umhang bekleidet, die eine Art dünne Trompete, mit der sie Kindern schöne Träume in ihre Schlafzimmer pustet, sowie eine Tasche mit sich führt. Sophie wird von der Gestalt dabei entdeckt, wie sie sie bei ihrem Streifzug beobachtet. Schnell versteckt sie sich unter der Bettdecke, doch der Riese streckt seine gewaltige Hand durch das Fenster, ergreift Sophie und entführt sie ins Reich der Riesen, denn er hat Angst, dass Sophie den anderen Menschen von ihm erzählt und diese dann Jagd auf ihn machen.